流感病毒現(xiàn)形記

目前，北京市已經(jīng)進(jìn)入季節(jié)性流感等呼吸道傳染病的高發(fā)季節(jié)。特別是進(jìn)入12月份以來，醫(yī)療機(jī)構(gòu)報(bào)告的兒童病例數(shù)上升幅度較為明顯，疫情大部分出現(xiàn)在小學(xué)一、二年級(jí)和幼兒園。

醫(yī)療機(jī)構(gòu)報(bào)告流感樣病例

如果一個(gè)患者得了感冒后到醫(yī)療機(jī)構(gòu)就診，醫(yī)生會(huì)根據(jù)患者的癥狀來初步判斷是不是屬于流感。但確定患者罹患的到底是不是流感，就需要采集咽拭子，然后進(jìn)行核酸檢測。這個(gè)讓流感病毒“現(xiàn)形”的過程由北京市疾控中心、各區(qū)疾控中心和部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)組成北京傳染病監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室來完成。一旦遇到疫情，疾控的實(shí)驗(yàn)室還要在規(guī)定時(shí)間內(nèi)采集標(biāo)本，完成病毒核酸檢測。

北京市疾控中心傳染病地方病控制所副所長楊鵬介紹，目前該所已經(jīng)建立起覆蓋全市一級(jí)以上醫(yī)院的傳染病關(guān)聯(lián)性病例監(jiān)測系統(tǒng)、流感樣病例監(jiān)測系統(tǒng)和腸道門診早期預(yù)警監(jiān)測系統(tǒng)，并在傳染病早期預(yù)警監(jiān)測模型研究方面居國內(nèi)領(lǐng)先地位。以冬季常見的流感為例，現(xiàn)在全市421家一級(jí)以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)每天都會(huì)實(shí)時(shí)上報(bào)流感樣病例的例數(shù)。楊鵬介紹，醫(yī)療機(jī)構(gòu)上報(bào)流感樣病例主要以癥狀判斷為主，這些數(shù)據(jù)是流感疫情的預(yù)警、預(yù)測的重要依據(jù)。不過，癥狀上判斷屬于流感樣病例的患者，到底罹患的是普通感冒還是流行性感冒；如果罹患的是流感，到底是哪種型別的病毒導(dǎo)致的，就需要通過實(shí)驗(yàn)得到答案。本周，記者走進(jìn)北京市疾控中心的實(shí)驗(yàn)室，在這里見證了一個(gè)流感患者的咽拭子標(biāo)本的檢測過程。

標(biāo)本乘專用電梯進(jìn)實(shí)驗(yàn)室

星期二上午，一批來自北京某醫(yī)院的疑似流感患兒的咽拭子標(biāo)本被送到了北京市疾控中心。這一批標(biāo)本一共10份，全部是前一天剛剛采集的。咽拭子標(biāo)本聽起來很神秘，不過看起來一點(diǎn)都不神秘：一個(gè)十多厘米長的塑料管中泡著一根幾厘米長的棉棒。“采集咽拭子時(shí)，工作人員會(huì)用壓舌板壓一下患兒的舌頭，隨著孩子發(fā)出一聲‘啊’，棉棒在喉嚨里轉(zhuǎn)一圈，采集過程就完成了。”棉棒會(huì)被放入管子里，里面的液體是“病毒保存液”。

采集好的咽拭子標(biāo)本會(huì)被放在小冰箱內(nèi)暫時(shí)保存。北京市疾控中心傳染病地方病控制所主任技師石偉先介紹，病毒對(duì)溫度很敏感，采集好的咽拭子標(biāo)本24小時(shí)之內(nèi)需要在4攝氏度的環(huán)境中保存；超過24小時(shí)后，咽拭子標(biāo)本必須放在零下70攝氏度的環(huán)境中保存。“常規(guī)的家用冰箱冷凍層溫度一般在零下18攝氏度，在零下20攝氏度左右的條件下，24小時(shí)后一部分病毒就會(huì)死掉；放在零下70攝氏度的環(huán)境中，即使放置一個(gè)月，死亡的病毒量也很少，這樣能保證存活的病毒足夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。”

這批標(biāo)本一共有10支。采集后24小時(shí)之內(nèi)，它們被送到了市疾控中心的“收樣室”，并且有了自己的“受理編號(hào)”。當(dāng)然遇到一些傳染性很強(qiáng)的病毒，比如SARS病毒、H5N1、H7N9禽流感病毒等，收樣過程就會(huì)簡化——直接送到實(shí)驗(yàn)室工作人員手中。

收樣室的工作人員給這批流感咽拭子標(biāo)本編號(hào)后，它們“坐”著專門的物流電梯，來到了市疾控中心實(shí)驗(yàn)室的呼吸道組。在這里，技術(shù)人員將進(jìn)行兩次檢測：一次是核酸檢測，目的是為了明確咽拭子中有沒有流感病毒，如果有，到底是哪一種流感病毒；第二次是進(jìn)行病毒培養(yǎng)，通過對(duì)流感病毒敏感的細(xì)胞或雞胚來培養(yǎng)病毒，獲得純化的病毒毒株，這些毒株會(huì)成為研究病毒各種特性的重要材料，比如進(jìn)行抗原性變化的檢測，可以為次年的流感疫苗病毒毒株選擇提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

石偉先說，目前全市的18家網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)了大部分檢測任務(wù)。北京市疾控中心除了進(jìn)行部分新采集標(biāo)本的檢測、對(duì)一些難以判定的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核檢測外，更重要的是對(duì)各區(qū)疾控中心的監(jiān)測標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)量控制，從而保證全市的標(biāo)本檢測能夠保持在同一水準(zhǔn)。

3小時(shí)讓乙型流感病毒現(xiàn)形

標(biāo)本被送到了實(shí)驗(yàn)室，很快，實(shí)驗(yàn)開始了。

這批標(biāo)本拆包后放在架子上立好，靜置之后，放到機(jī)器開始震蕩15秒，“這個(gè)過程是保證棉棒上采集的標(biāo)本能夠充分溶解在病毒保存液中。”核對(duì)標(biāo)本上的編號(hào)后，這些標(biāo)本就被送進(jìn)了病毒實(shí)驗(yàn)四室，這里主要完成第二類和第三類呼吸道病毒的提取工作。流感病毒標(biāo)本檢測中，最“危險(xiǎn)”的環(huán)節(jié)是標(biāo)本管開蓋的過程，“這個(gè)過程都在生物安全柜中完成。”生物安全柜是一個(gè)負(fù)壓柜，“這樣就能保證流感病毒不會(huì)擴(kuò)散到生物柜以外的空間中。”打開蓋子，先要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行分裝，就是將大采樣管中的病毒保存液平均分到3個(gè)2毫升的凍存管里，一個(gè)用于核酸檢測，一個(gè)用于病毒分離培養(yǎng)檢測，一個(gè)留作復(fù)核。用于核酸檢測的病毒保存液其實(shí)只要200微升左右，經(jīng)過多次過濾，在各種化學(xué)試劑的幫助下，包裹在病毒外面的外衣被“撕開”，病毒露出了被包在核心的核酸，這些核酸最后被收集起來的體積只剩60微升了，這就是核酸提取。

完成核酸檢測的提取步驟之后，很快病毒核酸就要被送到機(jī)器上進(jìn)行檢測。石偉先說，目前流感常見的病毒主要是四種，分別是甲型H1N1病毒、甲型H3N2病毒以及兩種乙型病毒。制備好的病毒融在反應(yīng)液中，被滴到一個(gè)個(gè)檢測孔中。“檢測用量以微升為單位。”石偉先需要用加樣槍來操作。她告訴記者，由于每次加注的液體量太少，稍有差池就會(huì)影響檢測結(jié)果，因此，操作時(shí)都是二人組合，“一個(gè)人加液，一個(gè)人監(jiān)督，保證不出現(xiàn)錯(cuò)誤。”

加入病毒核酸的檢測板被送到機(jī)器上進(jìn)行檢測。2個(gè)小時(shí)后，檢測結(jié)果會(huì)顯示出來。“你看，如果顯示的數(shù)據(jù)是一條直線，說明標(biāo)本是陰性的，也就是這個(gè)標(biāo)本沒有這種流感病毒；如果顯示的數(shù)據(jù)是一條光滑的S形曲線，證明這種流感病毒是陽性的，可以分析出到底患者感染了哪種流感病毒。”

歷時(shí)3個(gè)小時(shí)，標(biāo)本中的流感病毒已經(jīng)徹底現(xiàn)形——原來是一種乙型流感病毒。石偉先說，檢測病毒核酸除了可以確定病毒的種類外，還可以檢測到病毒的基因序列是否發(fā)生變化等。而在另外一間實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行的是針對(duì)分離到病毒毒株的抗原性檢測，可以判斷出病毒在人群中的抗原性是否發(fā)生變化。如果人群中抗原性發(fā)生了較大變化，說明病毒已經(jīng)徹底發(fā)生了變異，在第二年的流感疫苗制備中，需要重新推薦毒株，從而讓疫苗更好地發(fā)揮預(yù)防作用。

本報(bào)記者賈曉宏

甘南攝