復旦大學上海醫(yī)學院醫(yī)學分子病毒學重點實驗室袁正宏課題組、市公共衛(wèi)生臨床中心科研人員等合力攻關，通過長期研究，揭示了乙肝長期遷延不愈的根本原因，同時監(jiān)測到慢性乙肝抗病毒治療后cccDNA清除情況。相關研究在線發(fā)表在國際期刊上。

乙肝病毒是嚴重影響人類健康的病原體，它是造成慢性乙肝的元兇。世界衛(wèi)生組織2015年的研究估計，全球約有2.4億慢性乙肝患者，大多分布在低收入、中等收入國家。每年約有65萬人死于慢性乙肝感染所致的肝衰竭、肝硬化、肝細胞癌。我國現(xiàn)有慢性乙肝感染者9300萬人，在肝硬化、肝細胞癌患者中，由乙肝病毒引起的比例分別高達60%、80%。隨著我國乙肝疫苗接種的推行，嬰幼兒乙肝陽性率大幅降低。但對其他感染病毒者，仍缺乏徹底治愈方法，為家庭造成沉重的經(jīng)濟和健康負擔。

論文第一作者、市公衛(wèi)中心科學研究部博士張小楠介紹，大量臨床與基礎研究表明，慢性乙肝長期遷延不愈，根本原因在于乙肝病毒共價閉合環(huán)狀DNA（簡稱cccDNA）在肝內(nèi)長期存在，繼而導致病毒表面抗原血癥。由于cccDNA在患者體內(nèi)水平極低，傳統(tǒng)的分子生物學方法不僅檢測困難，而且無法顯示其組織內(nèi)的分布特點。

在袁正宏指導下，張小楠在bDNA信號擴增技術基礎上二次開發(fā)，成功建立了一種能在組織水平顯示cccDNA分布的原位雜交技術。該技術同時可顯示乙肝病毒的其他復制中間體。研究組將原位雜交、乙肝病毒主要抗原的免疫組織化學染色結合，獲得了病毒核酸與蛋白質的綜合圖像。令人意外的是，乙肝病毒抗原與核酸在單細胞水平均呈現(xiàn)驚人的“馬賽克狀”分布，即病毒的cccDNA。研究進一步證實，經(jīng)過1年以上抗病毒治療的患者，肝細胞內(nèi)仍存在乙肝病毒cccDNA。

研究組于是提出：在單細胞水平乙肝病毒存在“抗原富集期”“DNA富集期”和“潛伏期”的三階段假說，推測患者體內(nèi)肝細胞生理水平、病毒復制活躍度的變化可以導致三個階段的相互轉換。這一假說在單細胞水平描述了病毒生活周期的復雜變化模式，為進一步針對患者不同病情設計清除乙肝病毒cccDNA提供理論基礎。